雞肉中利巴韋林的檢測方案

一、 樣品前處理方法
        2g雞肉，加入15mL水，渦旋混勻，超聲提取10min，2000xg離心5min，取3mL上清進行固相萃取，固相萃取柱為HyperSep HyperCarb 色譜柱(200mg/3mL，貨號60106-301)，固相萃取步驟如下：
        活化：1mL 乙腈，1mL乙醇，負壓過柱
        上樣：3mL 上清液，1mL/min速率過柱
        洗脫：500μL 20%乙腈-水溶液洗脫，1mL/min
        洗脫兩次，合并洗脫液，直接進行LC-MS/MS分析。
二、 樣品分析方法
1. 儀器
       Accela HPLC；TSuantum Access MAX 三重串聯四級桿質譜檢測器；Hypercarb 液相色譜柱(100x2.1mm，5μm，貨號35005-102130)。
2. 參數設置
    液相參數：
            柱溫：室溫
            進樣量：10μL
            梯度：

質譜參數：

        離子化模式：電噴霧電離，正離子模式；

        質譜掃描方式：選擇反應監測（SRM）；

        分辨率：單位分辨率；

        毛細管溫度：350℃；

        霧化溫度：350℃；

        噴霧電壓：3700V；

        鞘氣壓力：30 arb；

        輔助氣流速：10 arb；

        碰撞氣壓力：1.0 mTorr；

        離子對參數見下表：

3.色譜圖
    見圖1。

圖 1  雞肉加標樣品檢測結果(利巴韋林濃度，1ppb；同位素內標濃度：1ppb)

三、 結果與討論
        利巴韋林為強極性化合物，使用水作為溶劑即可將其*提取。但常規色譜柱無法將其保留。Hypersep Hypercarb是Thermo Scientific*的固相萃取填料，基質為具有平面結構的多孔石墨化碳（PGC），能與極性化合物產生偶極-偶極相互作用而使其具有強保留性質，特別適合極性化合物的純化。
        本實驗中，使用HyperSep Hypercarb 進行樣品的純化，可以得到滿意的回收率，在50ppb的加樣回收試驗中，回收率為121.8%，重現性良好。且方法簡單，與現有方法相比，避免了反復調節pH值的步驟。而且，使用20%乙腈即可將目標物洗脫，避免在后繼的分析過程中產生明顯的溶劑效應。
        在分析過程中發現，利巴韋林色譜峰附近容易出現干擾物質，根據文獻判斷，可能為內源性的異構體。該異構體容易使結果出現假陽性，但使用HyperCarb色譜柱，在極為簡單的流動相條件下，即可實現分離。